1.4. CLONACIÓN ACIDOS NUCLEICOS
TRANSFORMACIÓN DE E.COLI CON pGAL
El objetivo de este experimento es desarrollar el conocimiento de la transformación bacteriana con ADN plasmídico. Y ofrece la oportunidad a los alumnos de observar un fenotipo adquirido en la transformación de células bacterianas. La presencia de colonias azules visualmente demuestra la expresión de un gen específico para el fenotipo lac +.
> Kit contiene:
Bactobeads E. coli GFP, ADN plasmídico pFluorogreen, tampón, medio, ampicilina, IPTG, CaCl2, Agar listo para usar, placas de Petri, pipetas estériles, asas de siembra y microtubos.
> Se necesita:
Micropipetas ( 5-50 microlitros), puntas, 2 baños de incubación (37 y 42ºC), estufa de incubación, termómetro, hielo, microondas y luz ultravioleta.
TRANSFORMACIÓN DE E.COLI CON PROTEÍNAS FLUORESCENTES VERDES
El objetivo de este experimento es desarrollar el conocimiento de la transformación bacteriana con ADN plasmídico.
Introduce la oportunidad de observar un fenotipo adquirido de proteínas fluorescentes verdes en la transformación de células bacterianas.
> Kit contiene:
Bactobeads E. coli GFP, ADN plasmídico pFluorogreen, tampón, medio, ampicilina, IPTG, CaCl2, Agar listo para usar, placas de Petri, pipetas estériles, asas de siembra y microtubos.
> Se necesita:
Micropipetas ( 5-50 microlitros), puntas, 2 baños de incubación (37 y 42ºC), estufa de incubación, termómetro, hielo, microondas y luz ultravioleta.
TRANS2
10 grupos de alumnos
TRANSFORMACIÓN MULTICOLOR
La Transformación es un proceso clave en la clonación molecular, ya que permite la selección, propagación, expresión y purificación de un gen. La selección positiva para las células que contienen ADN plasmídico se logra mediante la selección del crecimiento de las células en un medio con antibiótico.
En esta práctica, los estudiantes transformarán las bacterias con plásmidos multicolor que convertirán las células bacterianas (no patógenas) en células brillantes y coloridas.
> Kit contiene:
Bactobeads E. coli, ADN plasmídico, solución de transformación, caldo Lurie, ampicilina, IPTG, agar, placas de Petri, pipetas estériles, asas de siembra y microtubos.
> Se necesita:
Micropipetas ( 5-50 microlitros) y puntas, baño de incubación estufa de incubación (37ºC), termómetro, hielo y microondas (o placa calefactora).
CLONACIÓN DE UN FRAGMENTO Y ENSAYO ßGALACTOSIDASA
Cuando se subclona ADN en la región polylinker del plásmido pUC, la producción de ßgalactosidasa se interrumpe, resultando en que las células son incapaces de hidrolizar X-Gal.
Este experimento suministra un fragmento de ADN junto a un plásmido linear y ligasa T4. Después de la ligación se produce el plásmido recombinante y células competentes de E.coli son transformadas y el número de recombinantes son contadas.
Finalmente la actividad ßgalactosidasa es ensayada a partir de las colonias blancas y azules.
> Kit contiene:
Bactobeads E. coli GFP, ADN plasmídico pFluorogreen, tampón, medio, ampicilina, IPTG, CaCl2, Agar listo para usar, placas de Petri, pipetas estériles, asas de siembra y microtubos.
> Se necesita:
Micropipetas ( 5-50 microlitros), puntas, 2 baños de incubación (37 y 42ºC), estufa de incubación, termómetro, hielo, microondas y luz ultravioleta.
ED-300
5 grupos de alumnos
PROTOCOLO ACTUALIZADO 03/2024
Descarga el protocolo de EDVOTEK: #300 EDV190418
CONSTRUCCIÓN Y CLONAJE DE ADN RECOMBINANTE
La clonación se suele utilizar para realizar estudios de estructura y función génica, y para aumentar la expresión de determinados genes. Este experimento se divide en 5 módulos.
Los clones son construidos por ligación de un vector y fragmento para insertar. Los constructos son luego transformados en células competentes y las células crecidas y seleccionadas por resistencia a un antibiótico.
El ADN plasmídico es extraído de los clones y digerido con enzimas de restricción y analizado mediante electroforesis en gel de agarosa.
> Kit contiene:
Bactobeads, enzimas, ADN plasmídico, tampón de dilución ER, agua para reacción ER, marcador de peso molecular, tampón de reacción ER; agarosa, tampón electroforesis, tinción y pipeta calibrada.
> Se necesita:
Equipo de electroforesis, micropipetas y puntas, microondas, baño de agua, cubetas para tinción, transiluminador UV, racks para microtubos, pipetas de 5 o 10 ml, aguas destilada, etc.
